慢病毒载体构建-博特龙公司

了解产品参数及价格，请百度搜索“博奥龙”，进入博奥龙官0网，搜产品名称即可报价信息。欢迎在咨询~

博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

取血：

免0疫一周后，可以耳动脉取血检测抗0体效价。因为起初几次免0疫产生的抗0体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免0疫后，可以获得较高0效价的抗0体，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫0血。

前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血0清。

***后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下：

1、家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。

2、沿颈部中线用***刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔***，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血)。

3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松***，暴露出颈总动脉后用弯头眼0科镊使之游离，剥离***和结缔***。

4、于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。

5、用小拇指垫在血管下，用尖头眼0科***剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断)，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱。

6、松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。

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1、水佐剂不***抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体，慢病毒载体构建，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

2、水佐剂是一种水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免0疫动物。

3、水佐剂使用肌肉免0疫途径，与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫免0疫或脾内免0疫相比，极大地方便了使用。

4、水佐剂的***重要用途是可方便地用于制备小鼠多克0隆抗0体。常规多克0隆抗0体制备多使用兔子，不但免0疫针次多、抗原用量大和抗0体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委托外单位制备。使用快速水溶免0疫佐剂，任何动物实验人员均可方便快速地制备小鼠多克0隆抗0体，只需要简单地免0疫5只小鼠，即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克0隆抗0体。

5、水佐剂建议室温运输，2~8oC保存，无菌取用，有效期6个月。

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血0清的分离

如果用三角瓶或平皿盛血，将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr，转移到4oC沉淀过夜，第二天早上用吸管吸取血0清。如果用离心管收集，37oC烘箱放置2hr，转移到4oC沉淀过夜，第二天早上离心，10000RCF，10分钟。在血0清中加入NaN3 至终浓度0.02%，分装后-20oC保存。

小结：抗血0清获得之前要件的抗0体的效价、抗0体的特异性以及抗0体的亲和力；获得抗血0清之后，要分装保存抗血0清，一般情况下，-20度可保存数月至数年抗0体的效价都不会发生变化。抗0体的效价可以通过琼脂扩散试验和酶联免0疫吸附试验进行鉴定。