




作用机制:
佐剂增强免0疫应答的机制可能有:①改变抗原物理性状,延长抗原在机体内的存在时间和保持对免0疫系统的持续激0活作用,佐剂中的矿物油成分主要起缓释作用,有利于抗原在体内缓慢释放,延缓抗原在体内降解,从而更有效地刺激免0疫系统。②使抗原易被巨噬细胞吞噬,刺激单核巨噬细胞系统,增强其对抗原的处理和呈递抗原的能力。③促进淋巴细胞的增殖、分化,从而扩大和增强机体的免0疫应答的效应。
饲养层细胞制备
于细胞融合前一天,准备饲养层细胞,常选用小鼠腹腔渗出细胞,其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞,另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片,为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的数目应适宜,过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子,过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁,一般以铺满孔底 30% 为好。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制)。备注:推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。
2. 用振荡器充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl)与抗原按体积比1:1混合,并用振荡器剧烈振荡5-10min,核酸酶,直至静止放置10min水油相不分层。备注:与抗原混合前佐剂分层属正常现象,但必须充分混匀后才能取用。
3. 通过皮下或肌肉单点***免0疫动物,小鼠每针次100μl,家兔每针次200μl。
(1)佐剂与抗原混合后应尽快***,若放置时间较长出现水油相分层,则必须按上述步骤2重新振荡混匀;
(2)抽入针管前应摇匀,抽入针管后应尽快***;
(3)尽量选择引流淋巴0结附近(如腋窝和腹0股0沟附近)的皮下或肌肉进行免0疫。
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