




ELISA***盒的操作方法——双夹心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M***0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,酶联ELISA***盒价格,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,酶联ELISA***盒,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
ELISA***盒主要实验原理
·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相载体表面,原因是蛋白质和聚乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反应等活性;
·标记:抗原或者可通过共价键与酶连接成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其活性和酶的催化特点;
·显色:酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者结合后,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,酶联ELISA***盒哪家好,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者的相对含量。
ELISA***盒的成分
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,酶联ELISA***盒厂家,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N*** 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但***盒没有提供) (450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性***管(用于浓缩酶标记和显色剂)
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