ELISA***盒的操作方法——双夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M***0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，******ELISA***盒，即为阳性。
Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
重复性不佳，高CV值
1 样品不均一 加样前充分混匀样品，取样确保移液位置一致；
2 包被板表面遭到*** 洗板加样时尽量小心，避免***板的包被表面
3 孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作，避免孔与孔的污染；封板膜不能重复使用
4 加样量不一致 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴
5 边缘效应（外周孔显色较中心孔深） 孵育时尽量100 rpm旋转混匀
6 微量加样不准确 保证微量加样的准确性和均一性
7 不正确的洗涤 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，确定每一步的洗涤
Elisa***盒操作步骤
1．用盖片镊Elisa***盒将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将Elisa***盒培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，酶联ELISA***盒供应商，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，湖南ELISA***盒，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
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