快速染色液-博特龙(推荐商家)

注：对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验，一般染色10-20分钟（可以将100ng含量以上的蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；

对于灵敏度要求极高的染胶实验，一般可采用染色1-2小时（可以将10ng含量蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；

一般染色2小时后，蛋***带基本不会再加深，而背景会继续加深，所以一般建议染色不要超过2小时。

通用步骤

加血0清封闭液

1. 去掉片子上多余缓冲液。

2. 取适量血0清封闭液完全覆盖切片。

3. 在湿盒中室温孵育 15min。

4. 浸入洗涤缓冲液中 5min。

加一抗

1. 去掉切片上的多余洗涤缓冲液。

2. 将稀释的一抗加到切片上，完全覆盖***细胞。

3. 在湿盒中室温孵育 30min。

4. 用洗涤缓冲液洗去一抗，快速染色液，在洗液中润洗 5min。

注：如果显色速度过快，建议进一步稀释一抗，将一抗稀释度以 1/50、1/100、1/200、1/400 和 1/800，***佳稀释度的选择是显色 10min 后阳性显色效果满意而没有背景显色。

过度染色

1. 没有有效封闭内源性过氧化物酶。

2. 不完全脱蜡。

3. 过度***粘附。

4. 一抗稀释度不当。

5. 蛋白质非特异性结合。

不染色

1. 忘记加一抗、生物素化二抗或亲合素-HRP。

2. 处理过程中抗原***。

3. 固定不当。

4. 用含叠氮钠洗涤液。

5. 操作过程中样品彻0底干燥。

6. 未按操作程序操作。

染色较弱

1. 加免0疫***前没有将洗涤液去掉。

2. 抗0体稀释不当。

3. 显色前底物放置时间过长。

4. 过氧0化氢的***作用。