注意事项
1. 用辣根过氧化物酶时不要使用含有叠氮钠的***。
2. 避免使用含次氯酸的去污剂。
3. 设阳性对照、阴性对照和***对照。
4. 不要使用卵清蛋白作为切片粘连剂，使用明胶或多聚赖氨酸。
5. 孵育过程中不要使片子干掉。
6. 洗涤后洗涤液尽量去净。
7. 用低熔点石蜡以减少抗原变性（> 60°C）。
8. 用新鲜配制的 4%缓冲多聚甲醛可更好保存抗原活性。
加生物素化抗0体
1. 去掉缓冲液，擦掉切片周围的液体。
2. 加生物素化抗0体，TMB显色反应，完全覆盖切片。
3. 室温孵育 30min。
4. 用洗涤液洗去抗0体，用洗涤液润洗 5min。
加亲合素-HRP
1. 去掉缓冲液，擦掉切片周围的液体。
2. 加亲合素-HRP，完全覆盖切片。
3. 室温孵育 30min。
4. 用洗涤缓冲液洗去亲合素-HRP，用洗涤缓冲液润洗 5min。
显色
1. 加显色液（自备）显色。
可能出现的问题和解决方法
注：对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验，一般染色10-20分钟（可以将100ng含量以上的蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；
对于灵敏度要求极高的染胶实验，一般可采用染色1-2小时（可以将10ng含量蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；
一般染色2小时后，蛋***带基本不会再加深，而背景会继续加深，所以一般建议染色不要超过2小时。
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