T2***亲和柱公司-浙江T2***亲和柱-北京中检维康

亲和柱净化步骤

注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!

----3mL柱管取出上方堵头，T2***亲和柱厂家，减去上堵头螺纹下突出部分，插回柱子上，T2***亲和柱报价，另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象，不影响亲和柱的使用);

----准确移取上述混匀滤液，注入针筒中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过亲和柱;

----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液，先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗，再用10 mL 10%水冲洗柱子，之后用10mL水冲洗柱子。)，T2***亲和柱公司，流速1秒/滴，弃去流出液，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体;

----准确加入1.5mL(色谱级)洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，进行相关测定。

亲和柱——亲和层析介绍

将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，浙江T2***亲和柱，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其它分子的层析技术。

做亲和柱时，使用Sepharose 4B 和 Sepharose CL-4B有何不同？

Sepharose 4B指4%的琼脂糖

Sepharose CL-4B指4%高度铰链的琼脂糖

他们的区别在于铰链程度不一样，在亲和层析色谱中，介质铰链程度越高，化学稳定性就应该越高。这样就可以耐受更加苛刻条件洗脱而偶联的配基不会脱落。越是硬质的介质，耐受的流速也会越高。这样更节省平衡洗脱的时间。