饲养层细胞制备
于细胞融合前一天，准备饲养层细胞，常选用小鼠腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的数目应适宜，3C蛋白酶，过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子，过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁，一般以铺满孔底 30% 为好。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度（按每针次50μl用量配制）。
备注：推荐使用的抗原用量为
（1）免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg；
（2）亚单位蛋白抗原每针次1-10μg；
（3）免0疫原性较强的灭活病原微生物和病毒样颗粒抗原每针次1-10μg；
（4）肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。
2. 37oC水浴中解冻佐剂，充分混匀，无菌条件下取出所需用量（按每针次50μl）与抗原按体积比1:1混匀。
3. 通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0***免0疫小鼠，每只小鼠***100μl。
4. 第7天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次免0疫佐剂和抗原现配现用
5. 第014天通过ELISPOT、胞内细胞0因子染色、MHC四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或引流淋巴0结中的抗原特异性CD4+ TH1和/或CD8+ CTL反应。
细胞融合
取已免0疫小鼠的脾0脏用不完全培养基制成细胞悬液，计数。收集选择生长状态良好的 SP2 /0 骨0髓瘤细胞，制成细胞悬液，计数。将 SP2 /0 骨0髓瘤细胞与免0疫小鼠的脾细胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 选择培养基重悬混匀后滴入到铺有饲养层细胞的 3 块 96 孔细胞培养板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培养箱中培养。
3C蛋白酶-博特龙(推荐商家)由苏州博特龙技术有限公司提供。苏州博特龙技术有限公司在生物制品这一领域倾注了诸多的热忱和热情，博特龙一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场，衷心希望能与社会各界合作，共创成功，共创辉煌。相关业务欢迎垂询，联系人：刘总。