ELISA的基础是抗原或抗l体的固相化及抗原或抗l体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗l体仍保持其免l疫学活性，酶标记的抗原或抗l体既保留其免l疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗l体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗l体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗l体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗l体，cAMP assaykit，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免l疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗l体。然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。 
***准备
1. 非乙酰化cAMP标准品
将5000 pmol/mL cAMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管，400μL到#2至#6号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP标准品到#1管中，剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中，涡旋震荡。以此类推，重复上步操作，梯度稀释至#6管。
经以上操作，#1至#6管中cAMP标准品浓度分别为250，50，10，2，0.4和0.08 pmol/mL（详见cAMP实验稀释详情键盘纸）。稀释过的标准品需在30分钟内使用。
标记一只试管作为无标准品空白对照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。
2. 洗涤液
将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中，稀释成工作液。稀释液可在室温保存至***盒有效期限，或者3个月。
纽斯特生物的ELISA***盒适用于检测经过盐酸处理而终止内源性磷酸二酯酶活性的cAMP样品。这种样品可直接应用于检测，而不需要蒸发和进一步的处理。
***样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后，称量冰冻***样本并加入10倍体积的0.1M HCl混匀。室温以大于600g离心力离心，取上层清夜用0.1M HCl稀释至适当浓度。
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