武汉纽斯特生物科技有限公司（d），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往世界。
标准品制备
用1.0 mL通用稀释液重新配制标准溶液，在室内保存10分钟
温度，轻轻摇动（不要起泡）。标准品在原料中的浓度
溶液为20 ng/mL。请准备7支含有0.5 mL通用稀释剂的试管
根据下图制作一个双稀释系列。混合每根管子
在下一次转移之前检查。设置7点稀释标准，如20 ng/mL、10 ng/mL、5 ng/mL、2.5 ng/mL、1.25 ng/mL、0.62 ng/mL、0.31 ng/mL，***后一根EP管
采用通用稀释剂，空白值为0 ng/ml。
ELISA检测***盒应用定性夹心免l疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株氨基酸序列中抗原性很强的肽段，cGMP kit，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗l体，这些抗l体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗l体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与头一次孵育结合上的HEV IgM抗l体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗l体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值，按照本HEV IgM抗l体elisa***盒的测试标准， O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
实验步骤
使用前将各种***取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
快速加入***至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。
2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。
4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。
5. 移取100μL样品至相应的孔。
6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。
11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。
12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。
13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）
14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。
cGMP kit-武汉纽斯特生物由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。武汉纽斯特生物技术有限公司在生***工这一领域倾注了诸多的热忱和热情，武汉纽斯特一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场，衷心希望能与社会各界合作，共创成功，共创辉煌。相关业务欢迎垂询，联系人：黄经理。
