




自备材料:
1、细胞计数器
2、细胞冻存管
3、超低温冰箱或液氮
4、超净工作台
操作步骤(仅供参考):
1、培养细胞至对数生长晚期,显微镜观察其外观、形态、有无污染等,取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞,用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化,进行细胞计数;如为悬浮生长细胞,进行细胞计数。
2、500~1000g离心5min,弃上清。
3、加入适量的通用细胞冻存液,重悬细胞,使细胞浓度达到1~10×106/ml,置于冻存管中,密闭、不要拧的太紧,避免弯曲变形。
4、一般遵循1℃/min的速率进行冷冻。亦可采用4℃20min,-20℃30min,细胞冻存,-70℃过夜,***后置于液氮罐中长期存储。
产品描述:
使用动物血0清常会遭遇许多问题,例如:病毒感0染、或是其他动物源的污染原。使用无血0清制品培养与冻存细胞,可以消除这方面的隐患。此外,无血0清培养基可以确保细胞在化学成分固定的条件下生长,更进一步确保细胞冻存时的条件稳定。
Biological Industries(BI)开发无血0清细胞冻存液,细胞冻存与复苏后,平均活细0胞回收比例超过80%。与含血0清冻存液比较,BI无血0清冻存液细胞存活率都有较佳的表,BI无血0清细胞冻存液也适用于动物血0清培养的细胞冻存。

冻存细胞复苏步骤
1. 从冰箱中取出冻存的细胞,立即放入37℃水浴槽中快速解冻。
2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后,将其中的混合液移至离心管中,1000rmp,5分钟离心收集冻存细胞沉淀,移去上清液(操作时 小心,切勿将细胞沉淀移去)。
3. 加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓加入到细胞沉淀,轻柔地混匀,将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。
4. 镜检细胞后,可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。

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