慢病毒-博特龙(在线咨询)

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水佐剂免0疫步骤

步骤一：用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度。备注：推荐使用的抗原用量为（1）免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg（通常为10~20μg）；（2）免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg（通常为1~2μg）。

步骤二：充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。

步骤三：通过后腿小腿肌肉注0射免0疫小鼠，每只小鼠100μl。备注：本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快注0射。

步骤四：第21天按同样方式加强免0疫一针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。

步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内，　随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注：若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求，可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

单克0隆抗0体（单抗制备）制备过程有以下几个步骤：

步骤一：细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免0疫方案进行免0疫注0射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官，刺激相应B淋巴细胞克0隆，慢病毒，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二：细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾0脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

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实验步骤：

1、弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。

2 、吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。

3 、ELISA***盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶0标仪450nm 测长，630nm 参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.15，阳性判定标准：样品 OD 大于阴性 OD+0.15，阴性 OD 低于0.05按0.05算)。