Mouse cGMP kit-neweast

武汉纽斯特生物科技有限公司（d），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等。

做好对照

正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血l清、兔血l清或BSA等封闭。

通过鸟苷酸环化酶可以实现GTP转化为cGMP。在哺乳动物中，Mouse cGMP kit，存在2种类型的鸟苷酸环化酶:可溶性及膜结合的鸟苷酸 环化酶(8，10，11)。可溶性环化酶在一氧化氮与血红素辅基结合后，即被激l活。七层膜结合鸟苷酸环化酶（即跨膜鸟苷酸环化酶或鸟苷酸环化酶微粒）已被证实存在于人类***组中，鸟苷酸环化酶A和B是利l尿钠肽受体，鸟苷酸环化酶C能被热稳定***肠毒l素、鸟苷素和脲激l活。跨膜鸟苷酸环化酶的活性亦受胞内信号通路的其他受体信号所调控。

实验步骤

使用前将各种***取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。

快速加入***至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。

9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。

10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。

15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。