




杂交瘤细胞的筛选与克0隆
细胞融合后,培养于添加了 HAT 的选择培养基的 96 孔板中,培养一天后半定量换液,培养基更换时应注意轻缓,第 5 天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆,第 7 天左右,杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 ELISA 检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 MRJ 融合蛋白进行间接 Elisa检测,筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔,有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆,经过 3 次亚克0隆后,获得了能够稳定 分 泌 抗 MRJ 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm 培养皿的顺序扩大培养,部分细胞用于腹0水制备单抗,部分细胞冻存备用。
QuickAntibody系列免0疫佐剂有哪些特点?
与常规使用的弗氏佐剂相比,QuickAntibody免0疫佐剂具有免0疫周期短、针次少、无需乳化、抗原用量低、抗0体滴度高、抗0体亲合力高、易获得构象型表位的抗0体等多方面优点,详述如下:
1. QuickAntibody只需两针免0疫,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,与弗氏佐剂相比可减少免0疫针次。
2. QuickAntibody通过减少免0疫针次和降低每针次抗原用量,从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-50μg(通常为小鼠5-20μg,
兔子20-50μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒或全***以及病毒样颗粒抗原每针次1-10μg(通常为小鼠1-5μg ,兔子5-10μg)。

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甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白,分子量约70,000~72,水性佐剂,000道尔顿^,在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成,正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿,亦见于其他多种畸形,如先天0性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等∽J。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏***有密切关系一。。因此制备高0效特异的AFP单克抗0体(McAb)具有重要的意义。
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