




突变是指在PCR 过程中通过碱基错配从而引起蛋白质氨基酸的改变.
突变的应用:蛋白质相互作用
受体或配体结合结构域的界定;蛋白质相互作用结构域的鉴定
通过改变密码子偏性以提高表达水平,改变蛋白质活性,改变蛋白抗原性、稳定性和溶解性,改变酶的特异性,或许以及动力学特性,增加标签等.
DNA 元件
启动子或增强子,载体创建
突变的流程
1. 在dam+ 阳性的宿主菌E. coli.增殖获得化的模板DNA
2. 设计2条互补匹配的、突变位点居***的突变引物
3. 加入反应组分如buffer、 temte、dNTP、complementary mutagenic primers、QuikSolution&QuikChange Lightning Enzyme
4. 运行反应
5. Dpn I 消化化的模板
6. 转化感受态细胞、铺板筛选
7. 提取 DNA、测序鉴定

利用重组DNA技术使DNA分子在位置上发生特定的变化,从而收到定向的诱变效果。例如将DNA分子用某一种限制性核酸内切酶处理,再用分解DNA单链的核酸酶S1处理,以去除两个粘性末端的单链部分,BRaf(600R) Mouse,然后用噬菌体T4连接酶将两个平头末端连接起来,这样就可得到缺失了相应于这一限制性内切酶的识别位点的几个核苷酸的突变型。相反地,如果在四种脱氧核苷三磷酸(dNTP)存在的情况下加入 DNA多聚酶Ⅰ,那么进行互补合成的结果就得到多了相应几个核苷酸的两个平头末端。在T4接连酶的处理下,便可以在同一位置上得到几个核苷酸发生重复的突变型。

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