
cAMP作为的第二信使,可调节细胞对各种外源和内源信号分子的反应。 它主要通过激l活蛋白激酶、控制特定的离子通道、磷酸二酯酶调节细胞环核苷酸浓度以及激l活Epac(通过cAMP直接激l活蛋白交换)(3-6)来调节生理过程。通过腺苷酸环化酶可以实现ATP转化为cAMP。 哺乳动物体内的主要腺苷酸环化酶家族均是横跨膜的,具有9个亚型,且可通过G蛋白Gs或钙离子/钙调素(1)激l活。另外,还有一种可溶性的腺苷酸环化酶,可以通过碳酸盐或Ca2 +调节(7)。
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固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙l烯、聚苯乙l烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙l烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

ELISA的基础是抗原或抗l体的固相化及抗原或抗l体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗l体仍保持其免l疫学活性,cAMP ELISAkit,酶标记的抗原或抗l体既保留其免l疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗l体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗l体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗l体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗l体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免l疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗l体。然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。
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