转染***-博特龙技术有限公司(图)

哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。

将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类，即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注0射、电穿孔、脂质体介导的转染，以及***近出现的以高分子聚合物为载体的***传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体，通过病毒感0染的方式将外源DNA 导入到细胞中， 其中以逆转录病毒及腺病毒转染系统***为常用。

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使用方法

1. 将新鲜消化的 BHK-21 细胞接种到 24 孔细胞板中，每孔 1~2×105细胞，转染***，1ml 完全培养基。备注：可在生长旺盛的细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染，无需 18~24 小时的等候时间。

2. 将 2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染***分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注：质粒 DNA 和转染***的***适用量需要根据不同培养基来优化，但理论上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范围。

3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染***所需的 10~30 分钟的等候时间。

4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。

5. 将细胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后 4~6 小时补加血0清或更换培养基。

6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。

注意事项：

1. 质粒 DNA：请用能够去除内毒0素的方法制备高质量的质粒 DNA。

2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒0素纯水配制，高压消毒或除0菌过滤。

3. 培养基：经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试，推荐使用含 5~10%牛血0清的

DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。

4. 以 24 孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒0素质粒 DNA 用量为 2μg、转染***用量为 3~5μl，请

在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告***进行优化。

5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系，可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染，从而可节省

18~24 小时的转染前细胞培养时间。