快速佐剂-博特龙技术有限公司(图)

材料与方法

一、材料

AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。

二、方法

1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。

第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，快速佐剂，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔***，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔***，融合前3 d作腹腔***加强免0疫。

综上所述，新的改良的小鼠免0疫方法具有很好实验效果。孕妇血0清AFP水平的变化与唐氏***有密切关系。目前孕中期人绒毛膜促性腺激0素(HCG)联合AFP筛查唐氏***胎儿已成为欧美亚许多***常规服务项目之一，在假阳性率为5％左右情况下，这种筛查方案对唐氏***的检出率可以达65％～75％[9-11|。因而免0疫方法测定血0清中AFP浓度已在临床得到广泛应用。羊水和母体血0清中AFP浓度的升高，对胎儿***管缺陷和其他遗传缺陷的产前诊断，也具有应用价值。在大多数原发性肝细胞***和内胚窦***患者血0清中AFP浓度升高，检测AFP有助于肿0瘤的早期诊断，也是在治0疗过程中观察疗0效的一项指标。采用本实验新改进的方法制备AFP—McAb，对胚胎发育、***变过程中***表达、AFP的纯化、肝0***的导向治0疗以及提供诊断0***等都有重要的实际应用意义。

抗原制备及纯化

抗原制备: 参照文献［10］制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的，37 ℃ 培养过夜，次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养，当菌液 OD600达 0． 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG，37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG，37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品，超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。