








武汉纽斯特生物科技有限公司(d),系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意:在细胞体内环境条件下大约有10%的Ras被激l活,而在体外用GTPγS处理大约有90%的Ras被激l活。
1.
准备两个离心管,每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物(如果是纯的Ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug)。
2.
每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3.
一个管中加入5ul的100X GTPγS(终浓度即为100 uM)作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP(终浓度即为1 mM)作为阴性对照。
4.
将离心管置于30°C条件下反应30 min并不断搅动。
5.
终止反应:将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
本***盒利用竞争酶联免l疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP的水平。简而言之,将羊抗鼠多克l隆抗l体包被在酶标板上,细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP与固定数量的偶联辣根过氧化物酶的cAMP或碱性磷酸酶竞争性的结合抗cAMP单克l隆抗l体,已知的cAMP作为标准品来做标准曲线。经过一段时间孵育,洗掉所有***,加入底物进行显色。将多孔板置于酶标l仪上,于450nm或405nm波长下,进行读数。***的光强度与样品中cAMP的浓度呈反比关系。基于cAMP标准品所得曲线,通过测得的光密度可以计算出样品中cAMP的浓度。
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