




ELISA***盒的测试要求
做好对照
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,国产ELISA***盒供应商,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应。
实验条件的选择
在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,ELISA***盒供应商,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3)酶标记工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致***作用,应注意防护。有条件者应使用不致***、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
ELISA***盒检测过程中的注意事项
ELISA实验通用规则

ELISA***盒主要实验原理
·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相载体表面,原因是蛋白质和聚乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反应等活性;
·标记:抗原或者可通过共价键与酶连接成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其活性和酶的催化特点;
·显色:酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者结合后,呕吐***ELISA***盒供应商,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者的相对含量。
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