【摘要】 目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克0隆抗0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。 方法 以常规和改良两
种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄piao呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。
用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。 结果 在较短时间内，改良法能获得高0效价的免0疫
抗0体，与常规免0疫法相比有极显著差异(P<0．001)，同时改良法的细胞融合率和抗0体阳性率也显著高于常规免0疫法
(P<o．001)。筛选获得的高0效分泌抗人AFP—McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。 结论 新的改良方法优化了
常规的McAb制备中动物免0疫程序，并能成功筛选出AFP—McAb杂交瘤细胞系。
动物免0疫
使用 quickantibody 作为免0疫佐剂，对小鼠腿部肌肉***免0疫，细胞佐剂，MRJ 重组蛋白( 1 μg /mL) 与免0疫佐剂各200 μL 混匀免0疫 6-8 周龄 BALB / c 小鼠 4 只，每只*** 100 μL。初次免0疫后第 21 天同样的方法进行第二次免0疫，第 35 天尾静脉取少量血做效价检测，间接 ELISA 检测效价滴度高于 1 ∶ 8 000 则进行冲击免0疫，冲击免0疫直接以不加佐剂的 MRJ 蛋白对小鼠冲击免0疫一次，每只 20 μg。冲击免0疫后 96 h 内取脾0脏细胞做细胞融合。
由于改良免0疫法只需二次基础免0疫而常规免0疫法则需要2倍于改良法的免0疫次数，所以改良法抗原用量明显少于常规法，从而大大减少了实验成本的消耗。
此外，本实验通过对比两种免0疫方法的细胞融合率及抗0体阳性率，发现改良免0疫法均显著高于常规免0疫法。
经过后续实验，证明改良法免0疫小鼠的杂交瘤细胞经二次克0隆化后，抗0体阳性率可达检测孔的90％以上。杂交瘤细胞体外连续传代培养，并冻存复苏后仍具有分泌AFP—McAb的能力，并经染色体计数结果表明已成功获得一株AFP—McAb细胞株。这表明改良法与常规方法具有同样的有效性和稳定性。
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