不管是哪一种ELISA，它的操作都由以下几种基本的操作组合而成：①将抗原或抗体吸附到固相载体上；②加入待检样品以及后续试剂；③温育；④洗涤去掉游离未结合的反应物；⑤加入酶检测底物；⑥结果的判读。
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多。
测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。
常用的ELISA可以分为以下五大类：①直接ELISA；②间接ELISA；③夹心ELISA；④竞争ELISA；⑤竞争抑制ELISA。其他的ELISA都隶属于这五类ELISA或由这五类ELISA组合衍生。
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ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。
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