Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
样品或标准品OD超出正常范围
1 错误的样品或标准品的稀释 完全按照说明书稀释
2 偶联***浓度过高 按照说明书调整到的浓度
3 TMB底物孵育时间过长 调整到合适的孵育时间
4 样品或标准品污染 避免污染
5 错误的孵育时间或温度
4 样品或标准品污染 避免污染
5 错误的孵育时间或温度
ELISA***盒的操作方法——双夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml，天津庆大***ELISA***盒，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M***0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
Elisa***盒操作注意事项
1．Elisa***盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，庆大***ELISA***盒报价，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，庆大***ELISA***盒公司，如标本数量多，推荐使用排加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请***后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，庆大***ELISA***盒厂家，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按污染物处理。
9．本***不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
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