




1.免0疫:本产品与抗原混合搅拌能很快形成油包水状态,在1:1-1:2情况下都能形成稳定的乳液,1:2乳化较1:1粘稠些,乳化后滴水数周不散;经多品种抗原多种属动物测试免0疫效果极0好,由于乳
化彻0底牢固,因此跟其他佐剂相比比较不容易出现免0疫耐受现象。
2.单抗腹0水制备:将佐剂***BALB/C小鼠腹腔,每只0.3-0.5ml处理腹腔15天左右(一般12-18天),然后***杂交瘤细胞,建议每只***80万-100万个。腹0水会比普通佐剂晚出1.5天-2天,但通
常情况下腹0水的量是普通佐剂出量的1.5-2倍,且单抗腹0水效价不变。

使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度(按每针次50μl用量配制)。
备注:推荐使用的抗原用量为
(1)免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg;
(2)亚单位蛋白抗原每针次1-10μg;
(3)免0疫原性较强的灭活病原微生物和病毒样颗粒抗原每针次1-10μg;
(4)肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。
2. 37oC水浴中解冻佐剂,充分混匀,无菌条件下取出所需用量(按每针次50μl)与抗原按体积比1:1混匀。
3. 通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0***免0疫小鼠,快速佐剂,每只小鼠***100μl。
4. 第7天按同样方式加强免0疫1针。备注:每次免0疫佐剂和抗原现配现用
5. 第014天通过ELISPOT、胞内细胞0因子染色、MHC四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或引流淋巴0结中的抗原特异性CD4+ TH1和/或CD8+ CTL反应。

杂交瘤细胞的筛选与克0隆
细胞融合后,培养于添加了 HAT 的选择培养基的 96 孔板中,培养一天后半定量换液,培养基更换时应注意轻缓,第 5 天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆,第 7 天左右,杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 ELISA 检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 MRJ 融合蛋白进行间接 Elisa检测,筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔,有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆,经过 3 次亚克0隆后,获得了能够稳定 分 泌 抗 MRJ 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm 培养皿的顺序扩大培养,部分细胞用于腹0水制备单抗,部分细胞冻存备用。
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