cGMP antibody-武汉纽斯特

***准备

1. 非乙酰化cAMP标准品

将5000 pmol/mL cAMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管，400μL到#2至#6号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP标准品到#1管中，剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中，涡旋震荡。以此类推，重复上步操作，梯度稀释至#6管。

经以上操作，#1至#6管中cAMP标准品浓度分别为250，50，10，2，0.4和0.08 pmol/mL（详见cAMP实验稀释详情键盘纸）。稀释过的标准品需在30分钟内使用。

标记一只试管作为无标准品空白对照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。

2. 洗涤液

将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中，稀释成工作液。稀释液可在室温保存至***盒有效期限，或者3个月。

***盒组成材料和***

1. 羊抗小鼠IgG包被的96孔微孔板一张 catalog No.30101

该微孔板将特异性识别小鼠IgG 的山羊抗l体包被于可拆分酶标条上。

2. cAMP偶联的辣根过氧化物酶工作液6 mL catalog No. 30102

本包装含1000×偶联酶储存液和稀释缓冲液。

3. 抗cAMP的小鼠单克l隆抗l体工作液6 mL catalog No. 26002-2

本包装含1000×抗l体储存液和稀释缓冲液。

注意：为了稳定和长效的实验，抗l体储存于-80℃。在使用前将6μL 1000×偶联酶储存液加入到6 mL 稀释缓冲液中配制为工作液，并轻轻混匀。工作液请避免反复冻融。

4. 中和液6 mL catalog No. 30103

5. 10×浓缩洗涤液15 mL catalog No. 30103

含去污剂的磷酸盐缓冲液。

6. cAMP标准品0.25 mL catalog No. 30203

浓度5000 pmol/ mL

7. 显色底物A，12 mL catalog No. 30107

8. 显色底物B， 12 mL。 catalog No. 30108

9. 终止液，6 mL； catalog No. 30110

注意：该溶液有腐蚀性；储存时请旋紧瓶盖

ELISA检测***盒应用定性夹心免l疫检测技术，cGMP antibody，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗l体，这些抗l体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗l体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与头一次孵育结合上的HEV IgM抗l体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗l体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值，按照本HEV IgM抗l体elisa***盒的测试标准， O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。