ELISA***盒的操作方法——间接法
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1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，吉林四环素ELISA***盒，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知）0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二（抗）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.然后用DDW洗涤。
其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。
Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
显色淡，灵敏度偏低
1 ***盒未充分平衡 ***盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有***已平衡至室温（约25℃）
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）
3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥
4 包被遭到*** 操作温和，移液不能碰到孔底
5 样本和孵育条件不合适 按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。
6 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；
7 偶联HRP***污染 弃去***，重新配置
8 错误的稀释偶联HRP*** 弃去***，重新配置
9 TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色；S4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
10 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。
11 滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12 酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板，建议使用ELISA高吸附力板子。
Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
不正常的标准曲线
1 错误的方法重悬标准品 加入正确量的溶液重悬标准品，重悬充分
2 标准品稀释错误 按照说明书要求稀释标准品
3 标准品污染 使用一次性的灭菌吸头， 标准品贮存于2-8 ℃
4 错误的倍比稀释步骤 按照说明书倍比稀释标准品
5 波长选择错误 TMB为底物和以OPD为底物的***盒均有使用，而 前者比色波长为450nm，后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。
6 标准品混用 不同批号***勿混用
7 ***盒在运输途中时间太长，四环素ELISA***盒哪家好，温度太高，标准品失活 尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温
8 ELISA未终止而直接检测450nm和620nm TMB显色需终止后检测，否则会出现620nm比450nm读数高的现象。（数值仍有梯度规律）
吉林四环素ELISA***盒-北京中检维康公司由北京中检维康生物技术有限公司提供。北京中检维康生物技术有限公司位于北京市顺义区牛栏山腾仁路22号闽京蒲工业园3号楼201。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前中检维康在仪器仪表中享有良好的声誉。中检维康取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。中检维康全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。
