cAMP kit-纽斯特

注意步骤

1. 在使用前，将所有***放置30分钟，平衡至室温。

2. 用***预先润洗头在使用；取各种样品、标准品和***必需更换头。

3. 移取标准品和样品到微孔底部。

4. 从微孔的边缘加入***，以避免污染。

5. 本***盒使用可拆分的微孔酶标条，使用者可根据样品量多少进行拆分。未使用的酶标条保持干燥，密封于***盒提供的铝封袋中，于4℃保存。微孔酶标条需安装在相应的框架上使用。

6. 在加入显色底物前，cAMP kit，确保微孔内没有残留的洗涤液。微量残留的洗涤液可能导致分析结果的变化。

武汉纽斯特生物科技有限公司（d），系美国生命科学***供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA***盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和***等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往。

体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Ras被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Ras被激l活。

1.        

准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。

2.        

每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。

3.        

一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。

4.        

将离心管置于30°C条件下反应30 min并不断搅动。

5.        

终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。

通过鸟苷酸环化酶可以实现GTP转化为cGMP。在哺乳动物中，存在2种类型的鸟苷酸环化酶:可溶性及膜结合的鸟苷酸 环化酶(8，10，11)。可溶性环化酶在一氧化氮与血红素辅基结合后，即被激l活。七层膜结合鸟苷酸环化酶（即跨膜鸟苷酸环化酶或鸟苷酸环化酶微粒）已被证实存在于人类***组中，鸟苷酸环化酶A和B是利l尿钠肽受体，鸟苷酸环化酶C能被热稳定***肠毒l素、鸟苷素和脲激l活。跨膜鸟苷酸环化酶的活性亦受胞内信号通路的其他受体信号所调控。