




液相色谱常见问题
在日常工作中,遇见液相色谱仪哪些异常情况?又是如何解决的?
峰的问题:峰前沿,峰重叠,峰拖尾,鬼峰,基线漂移。
压力问题:超压,低压,压力波动。
硬件问题:日常损耗,HILIC柱,零件损坏。
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液相色谱柱知识
物理性质:
柱长,内径,如250*4.6mm。一般柱长在2—250mm,柱越长,分离度越高,但柱压更高,分离所需时间更长;但分离度与理论塔板数的平方根成正比,所以一昧增加柱长并不是有效的分离手段,一般情况下,150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。
粒径,影响色谱分离度。粒径越小,分离越快,柱效越高,HILIC柱采购,但柱压力越高,柱容易被污染,导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料,复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径,更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍,因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。本文来源于国内的第三方检测平台嘉峪检测网,提供检测实验、技术培训、仪器计量校准服务。
孔径,60A,120A,300A等。孔径小,则含孔率高,HILIC柱采购,比表面积大,载碳量高;色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配,保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配,通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上,一般小分子使用80—120A,大分子使用300A。
颗粒形状,一般有球形和不规则形,当使用黏度较大的流动相时,球形颗粒可以降低柱压,延长色谱柱寿命。
比表面积,指的是每克填料的表面积,如180m2/g—350m2/g,与粒度和含孔率有关;比表面积大,会增加样品与键合相之间的反应,增加保留和分离度;比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间,并不是比表面积大或者小就更好,需要选择合适的比表面积。

液相色谱
二元高压、四元低压:
二元高压系统:两种试液经过高压泵流入混合器,在其中充分进行空间混合,高压输入液体在混合器中混合会更加充分
四元低压系统:可以混合四种不同***配比,按照时间来吸取***,***在管道中会产生交界处的混合,同时会产品气泡,精度会一定偏差
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