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PCR 实验室基本要求:
1、 PCR 实验室依据所使用的方法可分为***准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室,有上述前面三个区域即可。各区域应完全***分隔,不应有任何的空气直通。
2、标准的PCR实验室产物分析区或三个区域的后一个区域(即扩增及产物分析区),空气流向应由室外向室内,可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。
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核酸检测PCR实验室建设要点:通常PCR实验室没有严格的净化要求,需根据实验内容确定实验室洁净度。当PCR实验样品需要保护时,实验室应设洁净空调系统。对于2019-nCoV核酸检测实验室,建议设置10万级净化。
气流***宜采用上送下排,送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到较小程度。在生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的上方附件不得设送风口过滤器排风口应设在室内被污染风险高的区域,单向布置,不得有障碍;不能以回(排)风夹墙代替排风直管,排风过滤装置与排风总管的连接必须全部是实体风管。
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PCR实验室为什么要进行三区隔离?
PCR反应过程中不断进行升温降温,液体蒸发又冷凝,PCR管中部分空气形成气溶胶,携带大量的DNA扩增产物(注意,1ng扩增产物中可作为模板的DNA片段数量,超过1ng起始模板中可扩增DNA片段数量的几百万倍甚至更高。比如人的***组DNA有30亿个bp,要扩增的单拷贝***片段是300bp,1ng起始模板中可以作为模板DNA片段只占总起始模板DNA总量的千万分之一)。如果在实验室打开含PCR扩增产物的管盖,大量携带DNA扩增产物的气溶胶就会涌出,扩散到空气中,从而对环境造成污染。
虽然在整个空间环境中DNA的含量很低,但由于理论上只要有1个可做为模板的DNA片段也能PCR扩增成功,这就是为什么在污染环境中阴性对照也能扩增出条带的原因。所以在PCR实验室(比如临床PCR检验实验室),通常有四区隔离(或至少是三区隔离)的要求。
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