RIP
技术概述
RIP是研究体内蛋白与RNA互作的重要技术。该技术先用甲醛等***交联细胞内的“蛋白-RNA”互作复合物，裂解细胞后，用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀，获得“靶蛋白-RNA”互作复合物，去交联分离其中的RNA;针对预测的靶蛋白结合RNA的序列设计引物，
做qPCR实验，验证预测的RNA是否与靶蛋白有结合，或者将分离出来的RNA做高通量测序，筛选到可能与靶蛋白结合的RNA。
技术流程
细胞交联-→细胞裂解-→免l疫共沉淀→去交联→RNA分离→建库→高通量测序(或qPCR)。
单细胞RNA测序
单细胞RNA测序也称scRNA-Seq。通常而言，一般的***细胞RNA-seq实验会产生1000万个读数，如果一个***的频率超过50RPKM，泸州pcr，即每百万读数中每千个碱基中超过50个，这一***即被认为有表达。泊松分布下，实时荧光定量pcr，1kb长的***有超过500个读数和4%的小变异系数，即CV值；哺乳动物细胞通产含有200，000个mRNA，因此至少要用50个单细胞一起才能到达小CV值；考虑到逆转录的效率和环境干扰等因素，为得到准确的表达和细胞种类的识别，pcr引物设计，需要使用的细胞数量实际要更多。
染色质免l疫共沉淀技术(ChIP)
基于体内分析而发展的染色质免l疫沉淀分析Chr omat in immunoprecipitat ionassay kit， ChIP)技术可以真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。由于ChIP采用甲醛固定活l细胞或者***的方法，dna检测，因此能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与***表达的关系。近年来，这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体***表达调控区域检查染色体活性，是深入分析***l症、心血l管病以及******系统紊乱等***主要通路的一-种非常有效的工具。
染色质免l疫沉淀分析(ChIP) 的基本原理是在活l细胞状态下，当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白、蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。细胞内，当F与Promoter相互结合时，它们必然靠的比较近或者契合在一起，这个时候用甲醛处理，能使它们之间产生共价键。固定的蛋白质DNA复合物通过超声或酶处理将其随机切断为-定长度范围内的染色质小片段然后通过抗原抗l体的特异性识别反应沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNAl片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。通过qPCR或二代测序，筛选与目的蛋白互作的未知DNA信息。
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