




透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,细胞实验外包公司,核染色质固缩、边.集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
结果评判:调亡细胞体积变小,细胞质浓缩。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象( c***itati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,细胞实验外包,产生调亡小体。
2、快速脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]:
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时,使其达到 50~60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 DNA/脂质体复合物方法如下:
①在 1 mL 无 DMEM 中稀释 PSV2-neo 质粒 DNA 或供体 DNA。
②旋转 1 秒钟,再加入脂质体悬液,旋转。
③室温下放置 5~10 分钟,使 DNA 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液,盐城细胞实验,用 1 mL 无 DMEM 洗细胞一次后弃去,向每孔中直接加入 1 mL DNA/脂质体复合物,37℃ 培养 3~5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20%FCS 的 DMEM,继续培养 14~24 小时,
(5) 吸出 DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜 10%FCS 的 DMEM,2 mL/孔,再培养 24~48 小时。
(6) 用细胞刮或消化法收集细胞,以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下:
(1) 接种细胞同前,细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 mL、20%FCS 的 DMEM,37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 DMEM,用 G418 选择培养液稀释细胞,使细胞生长一定时间,筛选转染,方法参照细胞筛选法进行。

骨sui内皮祖细胞的分离培养
方法:使用密度梯度离
心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化,使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133 表达情况.结果与结论:培养前4 d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖,并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞,细胞实验外包哪家好,CD133+细胞占19.2%,CD34+细胞占28.7%,CD34+ /CD133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.

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