步骤：(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、，逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞，用加的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSO***后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
“程序冷冻仪，也叫程序降温仪，主要用于细胞，胚胎，等物料样品的降温，、造 血、皮肤、、腺体、以及血管和瓣膜等的冷冻保存和移植应用，液氮经过欣谕程序降温仪控制后，以的温度接触样品，使样品降温下”程序降温仪是一款利用程序控温软件结合硬件组成的一套可精度高控温的设备，主要是控制液氮的流量来达到样品的温度变化的过程，所以样品感应的温度稳定性和精度高度很重要，这关系到样品的成活率。
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