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PCR实验室为什么要进行三区隔离?
PCR反应过程中不断进行升温降温,液体蒸发又冷凝,PCR管中部分空气形成气溶胶,携带大量的DNA扩增产物(注意,1ng扩增产物中可作为模板的DNA片段数量,超过1ng起始模板中可扩增DNA片段数量的几百万倍甚至更高。比如人的***组DNA有30亿个bp,要扩增的单拷贝***片段是300bp,1ng起始模板中可以作为模板DNA片段只占总起始模板DNA总量的千万分之一)。如果在实验室打开含PCR扩增产物的管盖,大量携带DNA扩增产物的气溶胶就会涌出,扩散到空气中,从而对环境造成污染。
虽然在整个空间环境中DNA的含量很低,但由于理论上只要有1个可做为模板的DNA片段也能PCR扩增成功,这就是为什么在污染环境中阴性对照也能扩增出条带的原因。所以在PCR实验室(比如临床PCR检验实验室),通常有四区隔离(或至少是三区隔离)的要求。
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PCR实验室管理细则规范:
1、本实验室进行临床***扩增检测及相关检验工作,不得进行其他实验操作。
2、本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床***诊断的主要技术手段,实验室分为四个区:
***储存和准备区(一区)、样品标本处理区(第二区)、扩增区(第三区)、扩增产物分析区(第四区)。各工区配备的设备、仪器仪表、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品和专门的工作服,工作服具有明显的识别标志。标本的接收有专门的标本接收处。
3、各工作区专门的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材、清洁用具不得混用。
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PCR实验室的设计规范
区域气压调节
***准备区和样品处理区宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染,可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果;核酸扩增区和产物分析区应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染***与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。PCR实验室缓冲区内可设置正压,使得室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。
各区域通过气压调节,使得在整个PCR实验过程中,***和样品免受气溶胶污染,并降低扩增产物对操作人员和环境的污染。另外各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人员流动与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。
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