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层析柱详细的操作方法是怎样的？

层析柱详细的操作方法：

以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例

1、吸附剂的处理及柱子装填

将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中，于105C活化2H后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5:95)比例泵人溶剂，至溶剂流出止。

2、上样

将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解，泵人中压柱柱头，然后泵人1000RID。

事半功倍的不锈钢层析柱使用技巧

柱子的尺寸为粗长的好。柱子越长，相应的塔板数就越高。柱子越，上样后样品的原点就越小（反映在柱子上就是样品层比较薄)，这样相对的减小了分离的难度。

无水无氧柱适用于对氧、水敏感，易分解的产品。可以湿柱，也可以干柱。不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能使产品分解，毕竟要分离的是敏感的物质，小心不为过。因为分离的物质比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加压、常压、减压，随需而定。因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。如果样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，树脂柱多少钱，也就可以省些了。

装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积（），装上蓄液球，大连树脂柱，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用（）将其冲入柱中。

压实。沉降完成后，加入更多的，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

检测。要更多地使用喷显剂，树脂柱供应，如果仅用紫外灯，树脂柱生产商，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。

送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。