步骤：(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、，逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞，用加的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSO***后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，广东程序降温仪，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
在细胞冻存的过程中，液态水转化为冰，细胞代谢停止。同时，水分也随之散失，导致细胞内盐、代谢物浓度改变，全自动程序降温仪，进而造成渗透压失衡，直接影响冻存细胞的复苏。同时，冷冻速率太快或太慢，容易导致细胞内水分丧失或形成大冰晶，都不利于细胞存活。通过使用程控降温仪，选择合适的冻存液，细胞程序降温仪，设定合适的升降温速率，液氮程序降温仪，可有效地克服上述不利因素。实践证明，（经温度补尝后）每分钟1-3℃的冷冻速率可大大提高冻存细胞的存活率。
细胞往往会在温度剧烈变化中。通过使用细胞欣谕程序降温仪，选择合适的冻存液，设定合适的升降温速率，可有效地克服上述不利因素。实践证明，（经温度补尝后）每分钟1-3℃的冷冻速率可大大提高冻存细胞的存活率。传统的生物样本降温通常采用-80℃低温冰箱进行分步骤冷冻，该方法的不足为：耗时长，整个降温过程大约需要一天的时间；在降温过程中需要人为多次转移，给样本的降温带来众多不可控因素，从而导致样本的存活率降低；无法有效地消除结晶过程中释放的潜热，增大了样本的率。
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