





在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 (baseline),pcr仪批发,荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。

我们上面提到了反应的原理,由此我们可以简单的推断:温度作为变性-复性-延伸的基本设置,这个是我们需要校准的一个项目。
那么在反应的过程中,温度示值与设定值是否准确,我们需要知道。这是个温度示值误差;因为我们需要升温,降温,升温,这是不是涉及到一个速率的问题,升降温的快慢,会直接影响到整个反应过程,所以,升降温速率也是我们需要考量的一个方向。仪器通过加热模块去控制温度,在快速升降温的过程中,仪器不可避免的会先升高/降低温度之后,pcr仪,再达到所设定的问题,这就是温度的过冲,这也是可能也是一个考量的指标。达到一定的温度之后,仪器要平衡一段时间(所设定的时间),而温度平衡的时间和设置的时间,是否一致,也是要考虑的一个方向。不同的DNA模板,需要的温度和解链的时间不一样,如果解链的时间没达到要求,DNA没有完全变性,在降温复性的过程中,会***到天然的状态。

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