我们上面提到了反应的原理，由此我们可以简单的推断：温度作为变性-复性-延伸的基本设置，这个是我们需要校准的一个项目。
那么在反应的过程中，温度示值与设定值是否准确，我们需要知道。这是个温度示值误差；因为我们需要升温，降温，升温，这是不是涉及到一个速率的问题，升降温的快慢，会直接影响到整个反应过程，所以，升降温速率也是我们需要考量的一个方向。仪器通过加热模块去控制温度，在快速升降温的过程中，仪器不可避免的会先升高/降低温度之后，再达到所设定的问题，进口PCR仪，这就是温度的过冲，这也是可能也是一个考量的指标。达到一定的温度之后，仪器要平衡一段时间（所设定的时间），而温度平衡的时间和设置的时间，是否一致，也是要考虑的一个方向。不同的DNA模板，pcr仪，需要的温度和解链的时间不一样，如果解链的时间没达到要求，DNA没有完全变性，在降温复性的过程中，会***到天然的状态。
将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的***片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，pcr仪报价，即可得出待测标本目的***的拷贝数。
升降速率
热力块的升降速率也将影响反应的效率。这是PCR循环各阶段之间温度变化的速度。
与老式仪器相比，现代PCR扩增仪的升温速度往往更快。较新的仪器具有更快的整体循环时间和更快的升降速率，实时荧光定量pcr仪批发，这意味着反应混合物在变性、退火和延伸步骤之间的温度时间更短。
一些现代PCR扩增仪可以通过其软件中的特定算法进行编程，以旧机器的升降速率。如果一个PCR方案是用旧机器开发和优化的，然后转移到较新的仪器上，这就特别有用。
PCR机器还包括计算反应混合物达到编程温度所需时间的算法，即所需的升降速率。为了使其准确，在PCR扩增仪上进行PCR循环编程时，必须包括反应体积。如果使用的反应体积大于所述，那么机器将错误地认为样品在实际达到所需温度之前就已经达到了。
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