细胞实验外包-英瀚斯(在线咨询)-南充细胞实验

脂质体瞬时转染

1、细胞H9C2 (Hela) 6孔板Hela1x10°/孔。

2、转染前换上没有抗sheng素的DMEM+胎清(10%)。

3、将质粒DNA (约2-4ul) 2ul 加入dorf管中+DMEM至50u1。

4、脂质体5ul补培养基至50ul混匀静止5分钟(质粒与脂质体比例为1:2或1.5:2.5)。

5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。

6、吸取混合物均匀加入每一个孔中。

7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基DMEM6ml+胎清600u1+三抗300u1。

8、培养24小时。

细胞增殖检测

     本公司应用MTT比色法， 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan，南充细胞实验，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二jia基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的Formazan，用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值，可间接反映huo细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

     该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏***测定等。服务内容      1. 细胞接种：收到客户细胞后，细胞实验外包费用，我们会用细胞计数板计数细胞，得出细胞悬液浓度。计算出应稀释的倍数，按MTT***盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液；

     2. 细胞培养：然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板，并实时观察细胞状态；  

     3. yao物处理并呈色：按不同浓度梯度加入yao物作用细胞；

     4. 溶解，比色：加入MTT检测***，按操作要求孵育相应时间，在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。

目的

学习和掌握外源***导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源***进入的一般性方法，细胞实验外包公司，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。

实验原理

上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。

外源***进入细胞主要有四种方法：法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源***进入细胞；病毒法是利用包装了外源***的病毒细胞的方法使得其进入细胞。但是由于法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。

利用脂质体转染法重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。