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层析柱详细的操作方法是怎样的？

洗脱

以一定比例的一为洗脱液，60ML/MIN的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2~3KG/C。按每份500ML收集，TLC检识展开剂一氯(2:8)，大孔树脂柱厂家，显色剂5%香草醛乙醇液

至洗脱相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加人适量热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。

层析柱再生、平衡

有效成分经TLC检识全部流出后，用纯5000ML再生，大孔树脂柱供应，一(5:95)平衡后，可再次上样，反复使用(使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2-6个月以上)。

层析的原理

正如在酶与底物的反应中，特异的废物（S"）才能和一定的酶（E）结合，产生复合物（E－S"）一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生复合物。而亲和层析与酶一底物反应不同的是，前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体L（对酶的配体可以是类似底物、或辅基等）以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂M－L，或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特***质的能力。因此，大孔树脂柱价格，当把围相载体装人小层析

蛋白层析柱操作流程

操作流程一般为：预处理、逆流洗柱、水洗、吸附、解吸和再生

1.预处理：在吸附树脂的生产过程中，一般采用的是工业级原料，产品没有经过进一步纯化处理，树脂内部残留少量单体，所以在使用之前，需用水溶性溶剂对其浸泡处理，然后用去离子水通过树脂层，置换出水溶性溶剂离子方可投入使用。

2.逆流洗柱：用水洗出去水离子及破碎填料，树脂装入后，大孔树脂柱，用蒸馏水反洗树脂层，直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。再依次用酸碱等浸泡、冲洗树脂层，至出水呈中性为止。

3.水洗：水洗的主要目的是除去所附着的渣滓。