我们上面提到了反应的原理，由此我们可以简单的推断：温度作为变性-复性-延伸的基本设置，这个是我们需要校准的一个项目。
那么在反应的过程中，温度示值与设定值是否准确，我们需要知道。这是个温度示值误差；因为我们需要升温，降温，pcr仪，升温，这是不是涉及到一个速率的问题，升降温的快慢，会直接影响到整个反应过程，所以，PCR扩增仪，升降温速率也是我们需要考量的一个方向。仪器通过加热模块去控制温度，在快速升降温的过程中，仪器不可避免的会先升高/降低温度之后，再达到所设定的问题，这就是温度的过冲，这也是可能也是一个考量的指标。达到一定的温度之后，仪器要平衡一段时间（所设定的时间），而温度平衡的时间和设置的时间，是否一致，也是要考虑的一个方向。不同的DNA模板，需要的温度和解链的时间不一样，如果解链的时间没达到要求，DNA没有完全变性，在降温复性的过程中，荧光pcr仪，会***到天然的状态。
在普通PCR仪的基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统的PCR仪称作荧光定量PCR仪。其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同，只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记，使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统得出量化的实时结果输出。把这种PCR仪叫做实时荧光定量PCR仪（qPCR仪）。荧光定量PCR仪有单通道、双通道和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候，选用单通道，有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记的目的***表达产物，因为一次只能检测一种目的***的扩增量，需多次扩增才能检测完不同目的***片段的量。主要用于***临床检测、生物研发、食品行业、科研院校等机构。
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