pcr-南京英瀚斯-pcr实验室

Southern杂交

实验原理

      Southern印迹杂交（Southern blot）是1975年由英国人southern创建，是研究DNA图谱的基本技术。Southern印迹杂交是进行***组DNA特定序列***的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNAl片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNAl片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，pcr实验室，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放l射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

外显子测序

外显子组测序（exome-seq）是对定向富集的***组DNA进行高通量测序，它能够以相对低的费用对人类外显子组进行拷问。2009年，外显子组捕获工具的出现，让外显子组测序这种技术迅速红起来。到目前为止，已有超过1万个外显子组被测序。

如今有多家公司推出了外显子组捕获***，包括罗氏NimbleGen、安捷伦、Illumina，还有现在的华大***。这些方法究竟孰优孰劣，pcr，斯坦福大学***院遗传学系的研究人员对市场上三个主流的外显子组测序平台进行了比较。该研究结果发表在《Nature Biotechnology》上。研究人员利用安捷伦、Illumina和NimbleGen的外显子组测序平台对同一个人类血液样品进行分析。他们的结 果表明，NimbleGen平台作为一个使用高密度重叠探针的平台，pcr引物设计，尽管覆盖了较少的***组区域，但在灵敏检测小的变异时所需的测序量也少。在同样获得80M测序数据的情况下，NimbleGen有97%的目标序列达到10x以上的测序深度，而其他产品只有90%。而安捷伦和Illumina的探针能够在低密度下捕获更多数量的变异。此外，Illumina还捕获了未翻译的区域，这是NimbleGen和安捷伦平台无法靶定的。研究人员还比较了同一样品的外显子组测序和全***组测序（WGS），显示外显子组测序能够检测到WGS错过的小变异。

除了文中提到了三个主流平台，外显子组捕获方面的新产品也在不断推出，研究人员的选择也将更广泛。罗氏NimbleGen即将推出新一代的外显子液相捕获产品。这一新产品将可捕获64M的***组序列，包括外显子以及miRNA，它含与其他NimbleGen液相捕获产品相同的2.1M高密度探针，以高xiao、均一、特异、的定向捕获。

1、细胞准备：细胞传到后，密度达到70％左右时进行转染；

2、细胞转染:取两个EP管，***检测多少钱，一个加入Opti-MEM、质粒和包装质粒；另一个加入Opti-MEM、lipo2000，然后将两管混匀；

3、细胞孵育：将混合液逐滴加入细胞培养皿中，混匀后孵育；

4、收集病毒：转染后48h、72h收集含慢病毒的上清；

5、滴度检测:细胞为30%－50％时加入病毒上清液，检测阳性细胞比例。