




3D细胞培养
3D多细胞肿liu球是在体外应用***培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2D贴壁细胞培养模型相比,3D多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用,从而更加贴近肿liu***中相应的病理生理特征。因此, 3D多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao物和毒性筛选及***工程等特定应用中。虽然3D多细胞肿liu球模型具有更显著的实体肿liu生理相关性,但是与2D贴壁细胞培养模型相比,获得大量相对统一的3D多细胞肿liu球模型需要-系列的培养过程和表征手段。
2、快速脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]:
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时,使其达到 50~60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 DNA/脂质体复合物方法如下:
①在 1 mL 无 DMEM 中稀释 PSV2-neo 质粒 DNA 或供体 DNA。
②旋转 1 秒钟,再加入脂质体悬液,旋转。
③室温下放置 5~10 分钟,使 DNA 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液,用 1 mL 无 DMEM 洗细胞一次后弃去,向每孔中直接加入 1 mL DNA/脂质体复合物,37℃ 培养 3~5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20%FCS 的 DMEM,继续培养 14~24 小时,
(5) 吸出 DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜 10%FCS 的 DMEM,细胞实验外包公司,2 mL/孔,再培养 24~48 小时。
(6) 用细胞刮或消化法收集细胞,以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下:
(1) 接种细胞同前,细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 mL、20%FCS 的 DMEM,37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 DMEM,用 G418 选择培养液稀释细胞,使细胞生长一定时间,筛选转染,方法参照细胞筛选法进行。

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