大肠菌群检测-格维恩-大肠菌群检测装置

肠：是肠产毒性大肠在生长繁殖过程中释放的外，分为耐 热和不耐热两种。

不耐热肠(Heatlabileenterotoxin，LT)：对热不稳定，65℃经30分钟即失活。为蛋白质，分子量大，有原性。由A、B两个亚单位组成，A又分成A1和A2，其中A1是的活性部分。B亚单位与粘膜上皮细胞膜表面的GM1***节苷脂受体结合后，A亚单位穿过细胞膜与腺苷酸环化酶作用，使胞内ATP转化cAMP。当cAMP增加后，大肠菌群检测，导致液体过度分泌，超过肠道的吸收能力而出现腹泻。LT的原性与弧菌肠相似，两者的抗交叉中和作用。

耐热肠(Heatstableenterotoxin，ST)：对热稳定，100℃经20分钟仍不被***，分子量小，原性弱。ST可上皮细胞的鸟苷酸环化酶，使胞内cGMP增加，大肠菌群检测，在空肠部分改变液体的运转，使肠腔积液而引起腹泻。ST与无共同的抗原关系。

肠产毒性大肠的有些菌株只产生一种肠，即LT或ST;有些则两种均可可产生。有些致病大肠还可产生vero。

平板计数法

　　大肠平板计数法检测分为两个阶段。在初培养中，选取2～3 个适宜的连续稀释度， 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿接种1mL。同时取1mL生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。迅速将 15mL～20mL冷却至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）加入每个平皿中。小心地旋转平皿，使培养基与样液充分混匀，等到琼脂凝固以后，再加入3mL～4mLVRBA 覆盖平板表层。翻转平板铺匀后，放在 36（℃±1）℃培养18～24h。平板菌落数按照以下方法选择：选取菌落数在 15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和的大肠菌群菌落。典型菌落呈现紫红色，并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为 不小于0.5mm。证实试验为：从VRBA平板上挑取10 个不同类型的典型和菌落，分别移种到BGLB肉汤管内，大肠菌群检测装置，（36℃±1）℃培养24～48h，观察产气情况。凡是BGLB肉汤管产气，就可以报告是大肠菌群阳性。证实是大肠菌群阳性的试管比例乘以以上步骤中计数的平板菌落数总数，再乘以稀释倍数，就是每g（mL）样品中大肠菌群数。

　　大肠菌群平板计数法操作起来比较简便，带有菌落的平板可以直接计数，还可以观察菌落特征，可见的菌落与大肠菌群量可以直接对应，便于得出定量结果，这种方法的缺点是因为大肠菌群在平板上很小，所以肉眼有时难以观察，需要用放大镜仔细辨认。验证实验需要挑选菌落，因此受人主观的影响很大，如果没有挑对或挑取的数量不够多都可能导致假阴性结果[3]。

针对这个问题，今天我们就掰碎了细细讲明白，总大肠检测，一次性解决大肠菌群MPN法报告的疑难杂症。

首先说明这两个单位的来源。2003年8月，***和标准化管理联合发布了《GB/T 4789.3-2003 食品微生物学检验 大肠菌群测定》，来替代1994版。这版的检测只有一种MPN法，但是却是大肠菌群检测的经典。在2010年3月，***发布了《GB 4789.3-2010食品安全 食品微生物学检验 大肠菌群计数》，这次推行的是强制性，内容进行充实，不但对MPN法进行重新要求，而且还增加了平板计数法，用于大肠菌群浓度较高的样品的检测。但是2010版正式实施的同时，***有关部门也并没有废除2003版，导致现在两版并存的现象。值得一说的是2016版也即将替代2010版，在此同时，***相关部门也并没有废除2003版的通知，因此在接下来的时间里，依旧会存在2003版和2016版并存的情况。