1. 包被N、C膜的抗原浓度对试验结果影响较大。多以蛋白质含量500～1000μg/ml为宜。浓度过高可出现假阳性，过低则降低试验的敏***。
2. 酶结合物浓度对试验成功与否至关重要。适浓度常与包被抗原浓度有关，应根据试验具体条件作方阵滴定来确定。
3. 显色时间，一般认为5-10分钟较好。显色时间过长常导致本底着色加深，多功能***，降低试验的特异性。
4. 用抗原包被NC检测时，待检样品加样不宜过多。加样过多可使相邻的样品混淆，一般5～10μl即可。
该设备近年来在EliSpot FluoroSpot 技术上发展起来的为***的酶联***斑点分析仪/荧光酶联***斑点分析仪，该设备结合了细胞培养技术与酶联***吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测的分泌情况，即用捕获培养中的细胞分泌的，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来，具有灵敏度高、单细胞水平/检测以及操作简便经济等有点。
激发波长至少涵盖250-1000nm完整连续波段，信阳***，适合绝大多数荧光染料，如Cy3、FITC、TRITC、PE、PI、GFP、DAPI、Cy5、Cy7及近红外染料等； 至少配备6块单波段激发滤光片，激发波长分别为360nm， 488nm， 550nm， 630nm， 710nm， 780nm； 至少配备6块单波段发射滤光片，***厂家，发射波长分别为450nm， 525nm， 570nm， 670nm， 805nm， 830nm； 同步完成96孔板斑点图像采集与计数需≤2 min ，每孔图像扫描和计数速度≤1.4sec； 具备自动斑点大小、斑点边缘识别以及融合斑点切割功能； 每个荧光通道分别成像，应用图像原位融合（Overlay）技术，将多副单色荧光图像叠加，保证共分泌细胞荧光斑点识别的准确性。
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