




层析柱详细的操作方法是怎样的?
层析柱详细的操作方法:
以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例
1、吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中,于105C活化2H后,取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充,填满整个柱体,不留死体积,密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5:95)比例泵人溶剂,至溶剂流出止。
2、上样
将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解,泵人中压柱柱头,大孔树脂柱多少钱,然后泵人1000RID。
柱层析技术上样用少量的溶剂溶解样品加样 ,加完后将底端的活塞打开 ,待溶剂层下降至石英砂面时 ,再加少量的低极性溶剂 ,然后再打开活塞 ,如此两三次 ,一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂 ,大孔树脂柱生产厂家,一开始不要加压 ,等溶解样品的溶剂和样品层有一段距离 (2~4 cm) ,大孔树脂柱,再加压 ,这样避免了溶剂 (如等 )夹带样品快速下行。很多样品在上柱前粘性较大 ,上样后在柱上又会析出 ,这一般都是比较大量的样品才会出现 ,是因为填料对样品的吸附饱和所致。有些样品溶解性差,能溶解的溶剂又不能上柱 ,这样就必须用干法上柱了。
柱层析技术
柱层析技术也称柱色谱技术。一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相,将混合样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配,大孔树脂柱供应,将不同组分逐一分离。
根据填充基质和样品分配交换原理不同,离子交换层析,凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离混合物的经典层析技术。
柱层析分离净化的实验技巧和方法
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