




层析的原理
凝胶过滤 凝胶过滤又叫分子筛层析,其原因是凝胶具有网状结构,小分子物质能进入其内部,而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 四、 亲和层析 亲和层析的原理与众所周知的抗原一、一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似,每对反应物之间都有一定的亲和力。
装柱。将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积(),唐山树脂柱厂家,装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用()将其冲入柱中。
压实。沉降完成后,加入更多的,用双联球或气泵加压,直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。
过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。收集的例子:10mg上样量,1g硅胶H,树脂柱厂家现货,0.5ml收一馏分;1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收一馏分。
检测。要更多地使用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,树脂柱厂家供应,紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
送谱。收集的产品旋干,树脂柱厂家批发,在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
层析柱有什么作用呢
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,从而分离的一种层析法。
柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程,吸附力较强的组分,移动的距离小,后出柱;吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱。
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