




层析柱详细的操作方法是怎样的?
洗脱
以一定比例的一为洗脱液,60ML/MIN的流速进行梯度洗脱,树脂柱生产厂家,柱的使用压力为2~3KG/C。按每份500ML收集,TLC检识展开剂一氯(2:8),显色剂5%香草醛乙醇液
至洗脱相同流份合并,回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加人适量热溶后自然放置,析出结晶,为冬凌草甲素。
层析柱再生、平衡
有效成分经TLC检识全部流出后,用纯5000ML再生,一(5:95)平衡后,可再次上样,反复使用(使用次数随原料不同而异,树脂柱供应,一般可连续使用2-6个月以上)。
层析柱的高径比如何影响树脂分离效果
分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在分离时,树脂柱,死体积不能超过总床体积的1/1000。
柱层析技术
溶剂的选择
选择一个合适的溶剂系统是柱层析分离的关键。在选用柱层析洗脱剂时首先要考虑三个方面的因素:溶解性 ( Solubil2ity)、亲合性 (Affinity)和分离度 (Res oluti on)。溶剂应选择价廉、安全、环保的 ,可以考虑、、、、和正己烷等等。但正己烷价格较高 ,很易挥发 ,和与硅胶的吸附是一个放热过程 ,易使柱子产生气泡。其他的溶剂用的相对较少 ,要依不同需要选择。另外值得一提的是 ,由于我们进行的是痕量分析 ,淋洗剂的纯度必须关注 ,一般使用残留级或 HPLC级的 ,树脂柱多少钱,如果是分析纯的必须进行精制。同时溶剂在过柱后回收使用 ,一方面环保 ,另一方面也能节省部分经费。
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