荧光概论
物体经过较短波长的光照，把能量储存起来，然后缓慢发出较长波长的光，发出的这种光就叫荧光。物质在吸收入射光的过程中，光子能量传递给物质分子。分子被激发，电子从较低能级跃迁到较高能级，形成电子激发态分子。电子的激发态的多重态用2s+1表示，s为自旋角动量数的代数和，国产荧光光度计公司，数值为0或1。分子中同一轨道里所占据的两个电子必须具有相反的自旋方向，即自旋配对。分子中全部电子都自旋配对，即s=0，该分子处于单重态，用S表示。若分子吸收能量后电子跃迁过程中不发生自旋方向的变化，这时分子处于激发的单重态；若跃迁伴随自旋方向改变，这时分子具有两个自旋不配对的电子，即s=1，分子处于激发的三重态，符号T表示。符号S0、S1和S2分别表示分子的基态、和第二电子激发单重态，T1和T2则分别表示和第二电子激发三重态。
荧光光谱定量分析
在低浓度时，溶液的荧光强度与荧光物质的浓度成正比：F=Kc。其中，F为荧光强度，c为荧光物质浓度，K为比例系数。这就是荧光光谱定量分析的依据。
上述关系不适用于荧光物质浓度过高时，荧光物质浓度过高，其荧光强度反而降低。原因有：
（1）内滤效应。一是，当溶液浓度过高时，溶液中杂质对入射光的吸收作用增大，相当于降低了激发光的强度。二是，浓度过高时，爱丁堡荧光光度计公司，入射光被液池前部的荧光物质强烈吸收，处于液池中、后部的荧光物质，保定荧光光度计公司，则因受到入射光大大减弱而使荧光强度大大降低；而仪器的探测窗口通常对准液池中部，从而导致检测到的荧光强度大大降低。
（2）相互作用。较高浓度溶液中，可发生溶质间的相互作用，产生荧光物质的激发态分子与其基态分子的二聚物或其他溶质分子的复合物，从而导致荧光光谱的改变和/或荧光强度下降。当浓度更大时，甚至会形成荧光物质的基态分子聚集体，导致荧光强度更严重下降。
（3）自淬灭。荧光物质的发射光谱与其吸收光谱呈现重叠，便可能发生所发射的荧光被部分再吸收的现象，导致荧光强度下降。溶液浓度增大时会促使再吸收现象加剧。
当然，荧光强度的影响因素还有溶剂、温度、pH值、散射光等，在定量分析中需要加以考虑。
荧光光谱定量分析的计算与其他光谱类似，包括标准曲线法、比例法等。
荧光光谱特点
灵敏度更高 g/ml，应用不如UV广泛。应用：①直接荧光光度法②作为HPLC的检测器（用的多）根据物质分子吸收光谱和荧光光谱能级跃迁机理，具有吸收光子能力的物质在特定波长光（如紫外光）照射下可在瞬间发射出比激发光波长长的光，即荧光。 分子受特定光照射后处于激发态的 分子返回基态时发出荧光， 其荧光强度与 呈线性关系， 从而可测出气体浓度。当检测仪器系统确定后，荧光总光强I与 浓度的之间的关系可表示为：I=KC在稳定的条件下，Edinburgh荧光光度计公司，这些参数也随之确定，k可视为常数。因此，式中I=kC表示的紫外荧光光强I与样气的浓度C成线性关系。这是紫外荧光法进行定量检测的重要依据。
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