




细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,***编辑技术,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照
结果示例:
图 A 细胞划痕实验图;B,动物细胞培养,C 细胞迁移和侵袭实验图
骨sui内皮祖细胞的分离培养
方法:使用密度梯度离
心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化,使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133 表达情况.结果与结论:培养前4 d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖,并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞,细胞毒性实验,CD133+细胞占19.2%,CD34+细胞占28.7%,CD34+ /CD133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.

流式细胞分选
流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选,汉中细胞,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞***、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%,保证样本中目标细胞的高回收率。
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