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柱层析技术

柱层析技术也称柱色谱技术。一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相，将混合样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配，将不同组分逐一分离。

根据填充基质和样品分配交换原理不同，离子交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离混合物的经典层析技术。

柱层析分离净化的实验技巧和方法

蛋白层析柱操作流程

操作流程一般为：预处理、逆流洗柱、水洗、吸附、解吸和再生

1.预处理：在吸附树脂的生产过程中，一般采用的是工业级原料，树脂柱多少钱，产品没有经过进一步纯化处理，树脂柱生产厂家，树脂内部残留少量单体，所以在使用之前，需用水溶性溶剂对其浸泡处理，然后用去离子水通过树脂层，置换出水溶性溶剂离子方可投入使用。

2.逆流洗柱：用水洗出去水离子及破碎填料，树脂装入后，用蒸馏水反洗树脂层，直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。再依次用酸碱等浸泡、冲洗树脂层，至出水呈中性为止。

3.水洗：水洗的主要目的是除去所附着的渣滓。

柱层析技术

柱子规格的选择

市场上有各种规格的柱层析分离柱。柱子长了 ，相应的塔板数就高 ，分离就好。目前市场上的柱子 ，其径高比一般在1: 5～10范围 ，四平树脂柱，在实际使用时 ，填料量一般是样品量的 30～40倍 ，树脂柱供应，具体的选择要根据样品的性质和含量进行具体分析。如果所需组分和杂质的分离度较大 ，就可以减少填料量 ，使用内径相对较小的柱子 (如 2 cm × 20 cm的柱子 ) ;如果 Rf相差不到 0.1，就要加大柱子 ，增加填料量 ，比如用 3 cm内径的柱子。